Elisa常見樣本的處理方法（二）
查看詳情Elisa 是一種快速、靈敏、準確可靠的一種定量分析方法，樣本的處理對于 Elisa 實驗的成功有著舉足輕重的作用。樣本收集的時間、處理方法和保存都會 影響到 Elisa 實驗的結果。上節(jié)我們介紹了血液（血清、血漿），組織勻漿、細 胞裂解液、細胞培養(yǎng)上清等常見樣本的處理方法，這一節(jié)我們將會介紹皮膚組 織、尿液、糞便、肺泡灌洗液、唾液、腦脊液、胸腹水、前列腺液、精液、陰 道分泌物等特殊樣本的處理方法，供研究者參考。1、痰液1）選擇痰液中較為粘稠部分稱重，加兩倍于痰量的 0.1% DTT(二硫蘇糖醇)， DTT 的主要作用是溶解粘液，......
云克隆的改良式酵母表達系統(tǒng)
查看詳情眾所周知，在基因工程領域，常用的表達系統(tǒng)共有三種，包括：原核表達系統(tǒng) (大腸桿菌 E. coli 表達系統(tǒng))、酵母表達系統(tǒng)(P. Pichia 表達系統(tǒng))和哺乳動物細胞表 達系統(tǒng)。原核表達系統(tǒng)由于操作簡單、成本低廉、表達效率高等優(yōu)點，被廣泛應用 于外源基因的蛋白表達。但同時，原核表達體系也有一些自身的缺點，比如容易形 成包涵體，不能進行翻譯后加工等等。為了盡量避免原核表達系統(tǒng)自身的不足，Cloud-Clone Corp.又另外開發(fā)建立了 酵母表達平臺。酵母表達外源基因具有一定的翻譯后加工能力，收獲的外源蛋白質 具有一定程度上的折疊加工......
ELISA試劑盒的穩(wěn)定性試驗
查看詳情ELISA 試劑盒（簡稱試劑盒）的穩(wěn)定性是指試劑盒在生產(chǎn)企業(yè)規(guī)定界限內保 持其特性的能力。根據(jù)實驗的目的和條件不同，穩(wěn)定性試驗可分為加速穩(wěn)定性試驗 和長期試驗。加速穩(wěn)定性試驗，通常在 37 度下進行，用于加快試劑盒中的生物試劑的化學 或物理變化速度考察試劑盒的穩(wěn)定性?？蓪υ噭┖性谶\輸、保存過程中可能會遇到 的短暫的超常條件下的穩(wěn)定性進行模擬考察，并初步預測試劑盒在規(guī)定的儲存條件 下長時間的穩(wěn)定性。取有效期內的試劑盒，在 37 度分別破壞 24 小時和 72 小時，檢測試劑盒的回 收率、線性和精密度，判斷試劑盒的有效性......
競爭抑制ELISA對小分子定量檢測的優(yōu)勢
查看詳情通常意義上來說，小分子是指分子量很小的化合物，一般分子量小于 1000 道爾頓（Dalton，Da）。在生物學領域，常見的小分子包括：多肽、多糖、氨基 酸、核苷酸等；其中也包括食品安全中涉及的“瘦肉精”、“三聚氰胺”等； 以及醫(yī)學檢測中的激素等。由于小分子通?；瘜W組分單一，化學結構簡單且分子量小，所以不具備免 疫原的基本化學特性。因此，小分子直接免疫動物是不能激發(fā)免疫應答而獲得 特異性抗體的，常用的免疫學檢測方法也很難對其進行定量檢測。現(xiàn)有的針對 小分子定量檢測的方法主要為高效液相色譜法......
競爭抑制ELISA標準曲線的擬合方法
查看詳情眾所周知，對于具有多個表位的抗原而言，雙夾心 ELISA（Double Sandwich ELISA）可應用于目標抗原或抗體的定量檢測。而對于小分子抗原或半抗原，因缺 乏可作夾心法的兩個以上的結合位點，因此不能用雙抗體夾心法進行測定。此時， 可以采用競爭抑制法模式來檢測其中靶分子的含量。競爭抑制 ELISA 又叫封閉 ELISA，其主要原理是將標本中的抗原和一定量的酶標抗原競爭與固相抗體結合。 標本中抗原量含量愈多，結合在固相上的酶標抗原愈少，最后的顯色也愈淺，也就 是說，最終顯色的結果與待檢抗原或抗體的干擾程度成負相關。小分子激素......
蛋白質印跡常見問題及解決辦法
查看詳情蛋白質印跡（Western Blot）是根據(jù)抗原抗體特異性結合的原理檢測復雜樣本 中的某種蛋白的方法。將混合抗原樣本在凝膠板上進行單向或雙向電泳，經(jīng)過 PAGE 分離的蛋白質樣品，轉移到固相載體上，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白 質，且能保持電泳分離的類型及其生物學活性不變。以固相載體上的蛋白質或多肽 作為抗原，與對應的抗體起免疫反應，再與或標記的第二抗體起反應，經(jīng)過底物顯 色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分。該技術廣泛應 用于鑒定蛋白以及對蛋白進行定性和半定量分析。蛋白質印跡分為蛋白質......
Elisa常見樣本的處理方法
查看詳情Elisa 是一種快速、靈敏、準確可靠的一種定量分析方法，樣本的處理對于 Elisa 實驗的成功有著舉足輕重的作用。利用 ELISA 進行檢測的樣本類型包括常 見的血液（血清、血漿），組織勻漿、細胞裂解液、細胞培養(yǎng)上清以及不常見的 皮膚組織、尿液、糞便、肺泡灌洗液、唾液、腦脊液、胸腹水、前列腺液、精 液、陰道分泌物等，這些樣本收集的時間、處理方法和保存都會影響到 Elisa 實 驗的結果。下面我們就常見的樣本處理方法，供研究者參考。1、 血液樣本血液采取后應盡快進行處理，使血清（漿）從與血細胞接觸的全血中分離 出來。血清與......
Elisa樣本測值低的原因
查看詳情ELISA 實驗中，實驗者經(jīng)常會遇到樣本測值低的問題，樣本類型包括血清、 血漿、組織勻漿、細胞裂解液等。假設客戶的操作完全正確，標準曲線良好， 這種情況樣本測值低可從兩方面進行分析：一是樣本本身含量可被檢測，但由 于實驗操作等原因導致樣本測值不在試劑盒檢測范圍內；二是分析物在樣品中 本身濃度偏低。下面將從這兩個方面來進行分析導致樣本測值低的因素以及對 應的解決方案。1.樣本本身含量可以被檢測，有哪些原因導致測值低呢？1）試劑盒的保存試劑盒要按照規(guī)定的方法保存，實驗者在購買試劑盒時請務必留心試劑盒 不同組......