活性蛋白 | 基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP2)活性蛋白
基質(zhì)金屬蛋白酶2（MMP2）是一種重要的酶蛋白，屬于基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）家族，分子量為72 kDa，也被稱為IV型膠原酶或明膠酶A。MMP2在細(xì)胞外基質(zhì)的降解和重塑中發(fā)揮關(guān)鍵作用，能夠分解IV型膠原蛋白、明膠等基質(zhì)成分，從而促進細(xì)胞遷移和侵襲。在生理過程中，MMP2參與血管生成、組織修復(fù)和炎癥反應(yīng)；在病理狀態(tài)下，其異常表達與多種腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。例如，在結(jié)直腸癌、乳腺癌等癌癥中，MMP2的高表達通常與腫瘤的侵襲性、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及不良預(yù)后相關(guān)。此外，MMP2還通過調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境中的信號通路，影響免疫細(xì)胞的活性，成為癌癥診斷和治療的重要標(biāo)志物和研究靶點。
○ 產(chǎn)品貨號：APA100Hu61
明膠酶譜分析（gelatin zymography）主要用于檢測明膠酶MMP2和MMP9，該方法靈敏度極高，10 pg的MMP2即可被檢出。簡要步驟如下：將不同濃度的MMP2（50ng、25ng、13ng、6.5ng、3.3ng、1.7ng）用SDS上樣緩沖液 變性，并在非還原條件下電泳至含明膠（1 mg/ml）的SDS-聚丙烯酰胺凝膠（10%）中。經(jīng)復(fù)性、孵育和考馬斯亮藍(lán)（CCB）染色后，活化的MMP2會水解周圍明膠，在凝膠上呈現(xiàn)白色條帶。本實驗使用胰蛋白酶（trypsin）作為陽性對照，結(jié)果如圖1所示。 重組人MMP2的酶活檢測采用熒光肽底物MCA-Pro-Leu-Gly-Leu-DPA-Ala-Arg-NH2在特定緩沖體系（50 mM Tris，10 mM CaCl2，150 mM NaCl，0.05% Brij-35，pH 7.5）中的切割能力進行評估。具體操作如下：將rhMMP2用緩沖液稀釋至100 μg/mL后，加入終濃度1 mM的對氨基苯汞乙酸鹽（APMA）于37℃孵育1小時進行活化。活化后的rhMMP2稀釋至2.5 μg/mL備用。在黑色酶標(biāo)板中每孔加入50 μL稀釋酶液，通過追加50 μL 20 μM底物啟動反應(yīng)（對照孔為50 μL緩沖液+50 μL底物）。立即使用320 nm激發(fā)波長和405 nm發(fā)射波長進行動力學(xué)檢測（5分鐘）。該條件下，重組人MMP2的比活力＞170 pmol/min/μg。
