一、流式細胞術檢測細胞胞膜分子

1. 細胞重懸：細胞處理計數后，用細胞洗液（含2% BSA的PBS）重懸細胞，使細胞濃度為1×10⁷/mL；

2. 對照設置：空白對照、同型對照、待測樣本每管取100uL上述重懸的細胞，使每管細胞數達到1×106/管；

3. 一抗孵育：空白對照管不加抗體，同型對照管和待測樣本管分別加入5-20uL同型抗體和靶標抗體（具體使用量參照說明書），充分混勻，至4℃孵育30min或冬季可至于室溫孵育30min，孵育期間每隔10min晃動一下反應管，使細胞和抗體充分反應；

4. 細胞清洗：加入適量細胞洗液，1000rpm離心5min，棄上清，反復洗滌2次；

5. 細胞重懸：使用100μL細胞洗液重懸細胞；

6. 二抗孵育：同型對照管和待測管分別加入適量的熒光標記的二抗，充分混勻，至4℃避光孵育30min或冬季可至于室溫避光孵育30min，孵育期間每隔10min晃動一下反應管；

7. 細胞清洗：加入適量細胞洗液，1000rpm離心5min，棄上清，反復洗滌2次；

8. 上機檢測：使用100-200μL細胞洗液重懸細胞，先測空白管和同型對照管，再測待測管。

二、流式細胞術檢測細胞胞漿分子

1. 準備細胞：細胞處理計數后，1000rpm離心5min，棄上清，用細胞洗液（含2% BSA的PBS）滌細胞一次；

2. 細胞固定：按照每2×10⁶個細胞加入1mL 4%多聚甲醛的比例使用4%多聚甲醛固定細胞，室溫固定10~15min；

3. 細胞清洗：加入細胞洗液，1000rpm離心5min，棄上清，重復清洗一次；

4. 細胞破膜：用破膜劑重懸細胞，加入至1.5mL EP管中，1*10⁶/管，體積為100μL/管；

5. 對照設置：空白對照、同型對照、待測樣本每管取100uL上述重懸的細胞，使每管細胞數達到1×10⁶/管；

6. 一抗孵育：空白對照管不加抗體，同型對照和待測管分別加入5-20uL同型抗體和靶標抗體（具體使用量參照說明書），充分混勻，至4℃孵育30min或冬季可至于室溫孵育30min，孵育期間每隔10min晃動一下反應管，使細胞和抗體充分反應；

7. 細胞清洗：加入適量的穿膜劑，1000rpm離心5min，棄上清，重復洗滌細胞2次；

8. 細胞重懸：用100uL穿膜劑重懸細胞；

9. 二抗孵育：同型對照管和待測管分別加入適量的熒光標記二抗，充分混勻，至4℃避光孵育30min或冬季可至于室溫避光孵育30min，孵育期間每隔10min晃動一下反應管；

10. 細胞清洗：加入適量的穿膜劑，1000rpm離心5min，棄上清，重復洗滌細胞2次；

11. 上機檢測：用100-200uL穿膜劑重懸細胞，先測空白管和同型對照管，再測待測管。