對(duì)于免疫檢測(cè)試劑盒生產(chǎn)商、診斷試劑廠商和大量使用檢測(cè)試劑的藥廠來(lái)說(shuō)，最大的困擾莫過(guò)于檢測(cè)試劑原料的限制了，隨著云克隆抗體對(duì)產(chǎn)品全線面市，這一難題迎刃而解。有了優(yōu)質(zhì)的抗體對(duì)，就能夠制備高效的免疫檢測(cè)試劑盒，包括雙抗夾心酶聯(lián)免疫檢測(cè)，化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)，酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)檢測(cè)，液態(tài)芯片分析系統(tǒng)和免疫層析法等。

下面我們?cè)敿?xì)介紹一下云克隆抗體對(duì)產(chǎn)品試劑組成，見表一，并以兩種抗體對(duì)最常用的應(yīng)用——雙抗夾心ELISA和免疫層析（膠體金）為例來(lái)介紹該類產(chǎn)品的使用方法。

云克隆抗體對(duì)產(chǎn)品試劑組成：
標(biāo)準(zhǔn)品：目的蛋白；
包被抗體：?jiǎn)?多克隆抗體；
檢測(cè)抗體：（生物素標(biāo)記的）單/多克隆抗體。

                        表1. 抗體對(duì)產(chǎn)品試劑組成

1.雙抗夾心ELISA：

1.1. 酶標(biāo)板包被抗體流程：

1.1.1按說(shuō)明書推薦的比例稀釋包被抗體，或者設(shè)計(jì)預(yù)實(shí)驗(yàn)用倍比稀釋的方式稀釋包被抗體，酶標(biāo)孔中加100ul包被抗體包被。酶標(biāo)板加上覆膜，4oC溫育過(guò)夜或37oC溫育2小時(shí)。

1.1.2棄去孔內(nèi)液體，每孔用350μL的洗滌液洗滌，浸泡1-2分鐘。在吸水紙上輕拍酶標(biāo)板來(lái)移除孔內(nèi)所有液體。此過(guò)程也可采用噴射瓶，多道移液器 或自動(dòng)洗板機(jī)來(lái)完成。

1.1.3每孔加入200ul封閉液封閉，37oC溫育1.5小時(shí)。

1.1.4 棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板1次，方法同步驟1.1.2。酶標(biāo)板包被抗體完成。

1.2. 實(shí)驗(yàn)流程

1.2.1按說(shuō)明書推薦的方法稀釋成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品工作液，或設(shè)計(jì)預(yù)實(shí)驗(yàn)設(shè)定倍比稀釋的多個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品工作液。酶標(biāo)板中依次加入100μL不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品，空白孔加100μL標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，余孔加待測(cè)樣品100μL，酶標(biāo)板加上覆膜，37oC溫育1小時(shí)。

1.2.2 棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板1次，方法同步驟1.1.2。

1.2.3 按說(shuō)明書推薦的稀釋倍數(shù)或使用多個(gè)不同稀釋倍數(shù)稀釋檢測(cè)抗體（生物素標(biāo)記的單/多克隆抗體），酶標(biāo)板中每孔加入100μL稀釋后的檢測(cè)抗體，酶標(biāo)板加上覆膜，37oC溫育1小時(shí)。

1.2.4 此后實(shí)驗(yàn)方法與常規(guī)ELISA實(shí)驗(yàn)同。

2.免疫層析（膠體金）：

2.1 膠體金標(biāo)記抗體的制備。將檢測(cè)抗體加入到膠體金溶液中，攪拌均勻，靜置0.5-24小時(shí)，逐滴加入牛血清蛋白，攪拌0.5－24h，靜置過(guò)夜。離心，棄去上清液。得到膠體金標(biāo)記抗體。

2.2 噴金。將膠體金標(biāo)記抗體噴在結(jié)合墊上，37oC抽風(fēng)烘干5－24h，得到噴金后的結(jié)合墊。

2.3包被C線。C線即是質(zhì)控線，用二抗包被。

2.4包被T線。T線是檢測(cè)線，用包被抗體包被。37oC抽風(fēng)烘干2－24h, 得到包被后的硝酸纖維素膜，浸泡在封閉液中，37oC抽風(fēng)烘干2－24h。

2.5 組裝。將聚氯乙烯底板、樣品墊、步驟2.2所得噴金后的結(jié)合墊、步驟2.3&2.4處理好的硝酸纖維素膜和吸水紙組裝，切割成條，得到膠體金免疫層析快速檢測(cè)試紙條；

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